流式抗体选择六步曲

1. 特异性靶蛋白：确定要检测目的细胞特异性靶蛋白。
2. 种属：严格按照待测样本种属选择抗体。
3. 应用领域：可用于流式实验，说明书中明确标注经FCM实验测试，最好有实验数据图和用量说明；若还可做荧光染色等多用途则更佳。
4. 抗体克隆号：同一抗体多个克隆号的情况下，可以选择荧光标记种类最多的那个克隆；若文献中有被引用，首先选择被引用的抗体克隆号。
5. 尽量选择直接标记的抗体：直接标记抗体是指荧光素标记的单克隆或多克隆一抗，一步染色，操作方便，影响因素少，结果准确。
6. 同型对照：与一抗的来源，Ig分型和标记完全一致，使用时与一抗相同的浓度。

标记方法的选择——直标or间标(Biotin)根据抗原表达丰度来选择：

• 直标抗体(一步法)：待测抗原表达丰度高的尽量选择直标抗体。
• 间标抗体：待测抗原表达丰度低的要考虑选择间接标记抗体（无荧光一抗 + 荧光二抗——两步法）或生物素标记抗体（无荧光一抗 + 生物素标记二抗 + 荧光标记链霉亲和素——三步法）。

荧光抗体的选择：
1、确定流式细胞仪的参数配置
在设计流式方案前，根据可能需要同时检测指标的多少数量，先确定需要在哪台流式细胞仪检测，对该仪器的参数配置，要了解以下几个方面信息：
激光器：常见的流式细胞仪有355nm、488nm和640nm三个激光器，但有些机器在购买时因某些原因，只装了一个488nm激光器，所以需要注意型号相同的机器也未必激光配置相同。
滤光片：也就是有几个检测通道，这决定了你最多可以同时检测几个指标。
仪器的具体型号：有助于再次确定检测通道。因为同一个荧光在不同的流式细胞仪上检测，有时候检测通道也是不一样的。

流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器

2、荧光的选择建议
荧光本身有强弱之分，可视抗原表达强弱及分群情况选择合适的荧光。抗原表达弱或分群不明显的建议选择强荧光例如：PE、APC；反之，抗原表达强或分群明显的建议选择最常用的弱荧光例如FITC。
常用荧光强弱排序程度为：PE>APC>PE-Cy5>PerCP-Cy5.5>FITC。
类似荧光的取代：Alexa Fluor、eFluor等这些荧光非常明亮，对激光稳定性好，对PH 值不敏感，具有水溶性。如Alexa Fluor488与FITC检测通道相同，但是荧光强度和光敏感上，前者明显优于后者，因此可以用Alexa Fluor488取代FITC。

Bioss推出的Alexa Fluor®系列荧光标记流式抗体广泛发表，影响因子逐年增高！

• anti-PTGER1, Alexa Fluor647 | bs-6316R-AF647
• anti-PTGER3, Alexa Fluor647 | bs-6376R-AF647
• Cell Stem Cell [IF=23.29]

• anti-CD31, Alexa Fluor488 | bs-0468R-AF488
• anti-FAPA, Alexa Fluor488 | bs-5758R-AF488
• Cell Metabolism [IF=20.57]

Bioss推出的Alexa Fluor®系列荧光标记流式抗体影响力已赶超其他所有荧光抗体
※Bioss使用的Alexa Fluor®系列荧光标记物均获Thermo Fisher使用许可。

☆注：蓝色代表PE标记的抗体；橙色代表FITC标记的抗体；灰色代表Alexa Fluor®系列荧光标记的抗体；黄色代表CY标记的抗体。